Медицинская реабилитация

Препятствие № 1 Фактор подавления роста | О спинальной травме

Мартин Шваб (проект w2P8, P3O) и его группа, сотрудники Института исследования мозга Цюрихского Университета, пришли к тому выводу, что наиболее актуальным следующим шагом в направлении получения наиболее эффективно действующих антител было бы установление биохимических и генетических характеристик указанного фактора подавления, во всей максимальной их полноте и детализации.

Одновременно, необходимо было самым тщательным образом изучить - как на основе лабораторных исследований самой клеточной культуры -in vitro (клеточная культура [Рис.2]), так и вживую - in vivo (на парализованном животном) - механизм действия этого фактора и оказываемое им воздействие. Первоначально фактор подавления определялся как протеиновая макромолекула молекулярным весом в 200000, полученная из миелиновых нейрооболочек, вырабатывающих глиальные клетки ЦНС (олигодендроциты) взрослых особей крыс. Первоначально полученные Швабом и распознающие эту молекулу антитела (IN-1) оказывали легко •прерываемый регенерериующий эффект на ряд поперечно- рассеченных нейроволокон. В последующем этот эффект был усилен посредством добавления факторов роста - так называемых нейротрофинов - на пораженный участок (см. Enfors, проект 22, No. VI). Регенерированные волокна сначала видимо окружают пораженный участок, т.е. участок отсутствия ткани, а затем начинают его перекрывать, иногда в виде тонкого тканевого как бы мостика. Исследования под электронным микроскопом показали, что не только поврежденные волокна начинают давать отростки и формировать новые связи, таким образом, возможно, способствуя восстановительному процессу, но также и неповрежденные волокна. Задачей первостепенной важности стало подтвердить этот, достигнутый на пути решения задачи регенерации, успех. В этих целях экспериментальные животные, как прошедшие, так и не прошедшие лечение, были переданы экспертам в США, которые подвергли их объективным тестам на проверку опорно-двигательных функций, и нашли, что произошел убедительный прогресс в состоянии опорно-двигательного аппарата этих животных.

Для более детализированного исследования фактора подавления требовалось большое количество нейроткани спинного мозга (М. Schwab and Christine E. Bandtlow, P21, Р28 - М.Шваб и Кристин Э.Бэндтлоу, проекты Р21, Р28). Необходимое количество было получено благодаря использованию коровьего спинного мозга. Сама процедура потребовала исключительно большого расходования ткани (Рис.3) и привлечения более чем одной исследовательской группы.

В конечном итоге была получена последовательность, как минимум, шести пептидных фрагментов исключительно чистых макромолекул молекулярным весом в 200000, и подготовлена для клонирования соответствующая сДНК. Благодаря этому возникла возможность производить в больших количествах посредством бактерий, • выведенных с помощью генной инженерии, не только исключительно мощные молекулы подавления, но также и относящиеся к ним антитела. Эти антитела оказались даже еще более эффективными, чем полученные ранее, и имели перед прежними некое практическое преимущество, состоявшее в том, что они легче усваивались пораженными участками спинного мозга. Более низкий молекулярный вес новых антител мог в итоге оказаться более выигрышным в том плане, что если бы речь зашла о лечении паралича человека, он тем самым лучше подходил бы особенностям человеческого организма. Эта проблема рассматривается ниже в контексте работы Патрика Аэбишера из Лозанны (см. проект Р29, No. XII), разработавшего новые методы обеспечения регенерации отдельных составляющих элементов при лечении людей.

Параллельно с вышеуказанными исследованиями, миелин-содержащие молекулы подавления роста были обнаружены также и в человеческом спинном мозге. Биохимически, они на 80-95% составлены точно так же, как и аналогичные молекулы крыс, мышей и коров. Работая в сотрудничестве с профессором А. Скерра из Дармштадского института технологии, Швабу и его группе удалось внедрить в антитела мыши, полученные на основе генной инженерии, часть человеческих антител. Указанный проект Р28 непосредственно задействован в настоящее время по проблеме эффективности новых фрагментов антител. А это уже первый шаг на пути к внедрению задач регенерации в клиническую практику!