Медицинская реабилитация

Значение иммунологических методов диагностики | Рассеянный склероз

Диагностически значимыми показателями у пациентов с PC являются (Хайер Д.,1997):

• повышение   уровня  g-глобулинов   в  спинно-мозговой   жидкости (СМЖ) (у 75% больных);
• выявление олигоклональных IgG в СМЖ (у 85-95% больных) уже на ранней стадии заболевания;
• повышенное содержание в СМЖ основного белка миелина, что может служить признаком обострения процесса; значения этого показателя более 9 нг/мл свидетельствуют об активной демиелинизации.

Для оценки характера течения PC используются менее инвазивные и более доступные методы (материалом для исследования является периферическая кровь):
методы определения субпопуляций Т- и В-лимфоцитов с помощью} наборов моноклональных антител (MAT) CD3+, CD4+, CD8+, CD16+, CD20+, СО25+и др.;
метод оценки пролиферации лимфоцитов: спонтанной и под действием Т- и В-клеточных митогенов (ФГА, Кон-А, PWM) – реакция бласттрансформации лимфоцитов;
метод определения активности супрессорных лимфоцитов: спонтанной и Кон-А индуцированной;
метод определения чувствительности иммунокомпетентных клеток к нейроспецифическим антигенам – белку S-100, антигену нейрональных мембран, основному белку миелина и др. – реакция торможения адгезии лейкоцитов;
метод определения кислородзависимой бактерицидности фагоцитирующих клеток периферической крови в тесте восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест);
метод радиальной иммунодиффузии в геле для определения количества иммуноглобулинов классов A, G, М.
Дифференцировочные антигены Т-лимфоцитов выделяют с помощью метода проточной цитометрии, непрямой иммунофлюоресценции, лимфотоксического теста. Для выполнения этих методов необходимы моноклональные антитела к дифференцировочным антигенам Т-1 лимфоцитов. С помощью поверхностных антигенных маркеров можно определить популяцию и субпопуляцию клеток, стадию их дифферентцировки и активации. Наиболее доступный метод иммунофлюоресценции основан на способности моноантител фиксироваться на поверхности жизнеспособных клеток и позволяет выявить специфические антигенные детерминанты: CD3, CD4, CD8 и др. после дополнительной обработки лимфоцитов антииммуноглобулинами, меченными ФИТЦ. I
Реакция бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) позволяет определить способность этих клеток отвечать трансформацией в бласты в присутствии митогенов: Т-лимфоцитов – в присутствии ФГА и Кон-А, В-лимфоцитов – в присутствии митогена лаконоса. Бласттрансформация наблюдается в тканях в результате антигенной стимуляции, образующиеся бласты способны к дальнейшей пролиферации и дифференцировке.
Определение количества В-лимфоцитов. В основе методик лежит тот факт, что на поверхности В-лимфоцитов имеются рецепторы для Fc-фрагмента иммуноглобулинов, для третьего компонента комплемента (СЗ), для мышиных эритроцитов и иммуноглобулиновые детерминанты. Наиболее значимыми поверхностными маркерами В-лимфоцитов являются рецепторы CD19, CD20, CD22, определяемые с помощью МАТ методом проточной цитометрии. Определение количества В-клеток и степени их зрелости важно при первичных гуморальных иммунодефицитах, когда необходимо осуществить дифференциацию между агаммоглобулинемией с В- и без В-клеток.
Количественное определение иммуноглобулинов. Наибольшее распространение получил метод Manchini et al. (1970), в основе которого используется радиальная иммунодиффузия в геле, содержащем моноспецифические сыворотки против иммуноглобулинов классов А, С, М. Уровни иммуноглобулинов рассчитывают после построения калибровочной кривой, выражающей зависимость между уровнем иммуноглобулинов и диаметром колец преципитации и выражают в мг/мл.
Определение уровня циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови. ЦИК являются результатом компенсаторной реакции антителообразования, направленной на элиминацию антигенов. Образование растворимых комплексов АГ-АТ провоцирует ряд патологических состояний: ревматизм, системная красная волчанка, артрит и др. Комплексы АГ-АТ-С вызывают повреждения тканей различной степени тяжести: от локальных до некрозо-геморрагических. Определение комплексов производят методом спектрофотометрии сыворотки крови, обработанной полиэтиленгликолем.
Тест восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) основан на способности восстановления поглощенного фагоцитом растворимого кра-'ля нитросинего тетразолия в нерастворимый диформазан под влиянием супероксиданиона, образующегося в НАДФ-Н-оксидазной реакции, наиболее доступен и прост цитохимический вариант теста (по Маянскому А.Н., 1993). Другим методом оценки респираторного взрыва в фагоцитах является измерение спонтанной и индуцированной хемолюминесценции. НСТ-тест может быть также измерен с помощью проточного цитометра. Показатели НСТ-теста значительно повышаются в начальном периоде заболевания при многих острых бактериальных инфекциях; при подостром и хроническом течении они чаще бывают снижены.
Реакция торможения адгезии лейкоцитов (РТАЛ) основана на прекращении адгезии сенсибилизированных лейкоцитов к пластиковым поверхностям в присутствии специфических антигенов. Индекс адгезии (ИА) рассчитывается как отношение среднего числа прилипших клеток в опытных лунках (содержащих раствор антигена) к таковому в контрольных лунках. Индекс менее 0,7 расценивается как положительная реакция, индекс более 1,33 – как слабо положительная.
Определение активности естественных киллеров (NK) проводят с помощью капиллярного теста, информативность которого возрастает при одновременном учете количества лимфоцитов с CD16 маркером. Принцип  метода заключается в сокультивировании исследуемых клеток и клеток-мишеней в плоском капилляре с трипановым синим. После инкубации учитываются окрашенные клетки-мишени, что соответствует% спонтанной цитотоксичности. Показатель активности NK-клеток у доноров составляет 15%, хотя коэффициент вариации колеблется от 10 до 23%.
В систему определения иммунного статуса может быть включено определение HLA -антигенов лимфоцитов, поскольку многие из них отражают риск развития тех или иных заболеваний. Определение производят с помощью МАТ методом проточной цитометрии или иммунофлюоресценции. Для клинической иммунологии имеет значение связь ряда антигенных маркеров человека с развитием тех или иных заболеваний. Антигенные маркеры рассматриваются как показатели риска развития или неблагоприятного течения заболевания. Выявлено, что здоровые лица, обладающие HLA-антигеном DR3, отличаются пониженной активностью клеток макрофагальной системы: сниженной способностью к продукции интерлейкина-1, замедленной деградацией антигенов, замедленным выведением из организма комплексов АГ-АТ, снижением способности лимфоцитов к стимуляции митогенами.
Объектом иммунологического исследования могут служить периферическая кровь, ликвор, слюна и другие биологические жидкости.
Значения иммунологических показателей у индивидов изменяются не только в онтогенезе, но и под действием различных факторов:

• Биологические ритмы
• Нагрузочные факторы:
• физиологические (естественные для человека): прием пищи, физическая и психоэмоциональная нагрузка, воздействие климатогеографических условий;

Таблица 10
Основные показатели иммунного статуса у здоровых лиц (М±т) (по данным лаборатории нейроиммунологии Института мозга человека РАН, зав. лаб. – проф. И.Д.Столяров)

– нефизиологические (неестественные, обычно вредные): сильное переохлаждение или перегревание, курение, воздействие химических веществ, радиации и т.д.).